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本生生物帶您了解ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)重要的步驟
更新時(shí)間:2020-04-20瀏覽:1245次

  本生生物帶您了解ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)重要的步驟

  elisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。雖然elisa試劑盒的操作步驟看似簡(jiǎn)單,但沒(méi)做到位的話就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的效果。所以elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)至關(guān)重要的步驟有:

  一、重要的洗滌

  不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來(lái)不理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。有必要的話,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高,懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

  二、關(guān)鍵的封閉

  封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。如果背景過(guò)高,懷疑封閉不充分,那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。

  目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。

  三、抗體濃度須優(yōu)化

  如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。

  四、檢測(cè)試劑要適量

  切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高,或者未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終d止液。

  只有確保每一步操作都做到位,才會(huì)呈現(xiàn)完美的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以elisa實(shí)驗(yàn)的每一步都很重要,不可以掉以輕心。

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