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熒光定量PCR(qPCR)方法用途及說明
更新時間:2021-05-07瀏覽:4087次

  熒光定量PCR(qPCR)方法用途及說明

  熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應的實時監(jiān)測,簡稱qPCR。

  (經(jīng)典法)

  1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求,更適合細胞治療,CAR-T,抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢。

  2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

  3) 廠家可協(xié)助完善方法驗證步驟。

  支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒(一步法)

  1)適合科研單位檢測,或單位內(nèi)檢,用熒光定量PCR(qPCR)法檢測細胞或其他生物基質(zhì)。

  2) 比藥典操作標準合并了一步,(將內(nèi)控對照試劑預先混合在PCR mix試劑中),操作更簡潔。

  3)樣本量為2μl,靈敏度為50個基因組拷貝/反應。結果準確。

  優(yōu)點:

 ?、凫`敏度高、特異性強。

  ②時間短,2-3小時出結果。

 ?、蹤z測結果可定量。

 ?、懿僮骱啽恪?/span>

  缺點:

 ?、賹τ谝炎鲋гw滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會出現(xiàn)假陽性。(可用培養(yǎng)法做補充驗證)

 ?、诓煌瑥S家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導下使用。

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