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談一談熒光定量PCR管的實驗原理及操作使用
更新時間:2022-09-26瀏覽:1366次
  熒光定量PCR管的實驗原理:
 
  實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)是指同時監(jiān)測PCR過程的能力。因此,可以在PCR擴增過程中收集數(shù)據(jù),而不是在PCR后。這給基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來了革命性的變化。在實時熒光定量PCR(qPCR)中,反應的特征是在循環(huán)中檢測到目標擴增的時間點,而不是在一定循環(huán)數(shù)后目標分子的累積擴增量。目標核酸的初始拷貝數(shù)越高,熒光顯著增加的速度越快。相反,終點試驗(也稱為“讀數(shù)板試驗”)測量PCR循環(huán)結束時PCR產(chǎn)物的累積量。
 
  熒光定量PCR管的操作使用:
 
  1、樣品制備
 
  根據(jù)實驗需要,向cDNA模板中加水進行適當稀釋,渦旋混合和離心,根據(jù)檢測到的樣本和基因的實際數(shù)量計算樣本添加系統(tǒng),根據(jù)系統(tǒng)添加ddH2O、qPCRmix、引物,制備一管混合、渦旋混合、離心。準備適量的qPCR八排板或96孔板。在這里,我們使用八排試管,將它們放在冰上進行操作,然后將上一步中混合的混合物壓至19μL,每孔添加一μL到八排孔中。
 
  2、增加模板
 
  向每個孔添加1μLcDNA模板。添加樣品后,蓋住八排管蓋,并嘗試從孔邊緣壓縮管蓋。渦流混合和離心以去除氣泡。
 
  3、計算機響應
 
  操作機器前的程序設置如下:設置反應溫度,設置孔板信息,將樣品放入儀器,開始反應。
 
  4、導出數(shù)據(jù)
 
  反應后,獲得qPCR數(shù)據(jù)。根據(jù)溶解曲線,檢查數(shù)據(jù)的有效性,將數(shù)據(jù)導出為Excel文件并保存。
 
  5、實驗結束
 
  實驗結束后,打開qPCR儀器,取出8根相連的試管,蓋上qPCR儀器并關閉計算機和儀器。
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