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BUNSEN本生Elisa試劑盒實驗的技巧及注意事項
在操作elisa試劑盒實驗前,不少老師會找尋很多的相關實驗資料,網上的資料一大堆,然而真正所能夠需要用到的技巧和注意也就那幾條,熟練的了解并掌握之后再應用到實驗中就會簡單的多。
一、加樣的經驗總結
加樣或加試劑時,請注意在吸取標本/標準品,酶結合物或底物時,個孔與一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間控制 在10分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
二、孵育的三條必知
1.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標 板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);
2.洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);
3.同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
三、ELISA洗滌小技巧
洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直 接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響*后的酶標儀讀數(shù)。
四、反應時間的控制
加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔 10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
五、操作說明
1.封板膜只做一次性使用。
2.標本中待測物質含量過高時先將樣本稀釋一定倍數(shù)后再測定,計算時請乘以稀釋倍數(shù)。
3.各步加樣均使用加樣器,并經常校對其正確性,一次加樣時間控制在5分鐘內(標本數(shù)目多的時候,本生推薦使用排槍加樣)。
4.液體標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
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