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本生詳解:胎牛血清運(yùn)用中遇到常見問題
1、怎樣貯存和凍結(jié)血清才不會使產(chǎn)質(zhì)量量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于 2~8 ℃ 冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須留意的是,融解過程中必須規(guī)矩地?fù)u晃均勻。長時(shí)間貯存在 2~8 ℃ 時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)或許集合而形成沉積或可見的混濁。因而,推薦在 -20 ℃ 以下貯存血清,并防止反復(fù)凍融。
我司主張血清應(yīng)保存在 -20 ℃。若存放于 4 ℃ 時(shí),請勿超越一個(gè)月。若一次無法用完一瓶,主張無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2、怎樣防止血清中發(fā)生沉積?
按如下操作可防止沉積的發(fā)生:
(1) 凍結(jié)血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉積的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時(shí),須規(guī)矩?fù)u晃均勻 (當(dāng)心勿形成氣泡),使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由 -20 ℃ 直接至 37 ℃ 凍結(jié),因溫度改變太大,簡單形成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉積。
(4) 勿將血清置于 37 ℃ 太久,否則血清會變得污濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因而受到破壞,然后影響血清的質(zhì)量。
(5) 血清的熱滅活十分簡單形成沉積物的增多,若非必要,可以無須做此過程。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守 56 ℃,30 分鐘的準(zhǔn)則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會形成沉積物的增多。
3、 血清中包括絮狀沉積,它們是什么,怎樣處理?
沉積包括纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除掉沉積,離心血清(400 g,1~2 分鐘)或許簡略的讓其沉積在瓶子底部,將血清當(dāng)心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不主張采用過濾的方法除掉沉積,因?yàn)槌练e會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況悄悄搖擺沉積并加熱至 37 ℃ 就會再溶解。所以,運(yùn)用產(chǎn)品時(shí)要搖擺并加熱血清至 37 ℃,沉積會自然消失。
4、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與留意事項(xiàng)?
來歷不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS)是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候, 通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生 10 至 14 天的小牛。
組份與份額不同:兩者所含的促細(xì)胞成長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與份額不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能成長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,運(yùn)用濃度不同,一般在 5%~10%,有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和運(yùn)用須留意:血清應(yīng)保存在 -5 ℃ 至 -20 ℃,若存放在 4 ℃ 不行超越一個(gè)月。凍結(jié)血清時(shí) ,應(yīng)先將血清至于 2~8 ℃ 冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不行將冷凍的血清直接放入 37 ℃ 水浴或許溫箱中,如放在 37 ℃ 凍結(jié),色彩加深,粘稠度也會添加,血清在凍結(jié)和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于 -20 ℃ 保存,防止反復(fù)凍融。
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