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飽和酚是分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)的重要實(shí)驗(yàn)品,常用于樣本中DNA的提取、RNA的提取等。
飽和酚在核酸純化中有2種,一種為Tris飽和酚,故也稱為堿性酚,另一種就是酸性酚,也就是水飽和酚(表1)
表1 飽和酚參數(shù)
名稱 | 別名 | pH | 外觀 | 用途 |
水飽和酚 | 水平衡酚 | <5.0 | 無(wú)色分層溶液 | RNA提取 |
Tris飽和酚 | Tris平衡酚 | >7.8 | 黃色分層溶液 | DNA提取 |
試劑成分的作用:
(1)用于RNA提取時(shí),則要制備酸性酚,也就是水飽和酚,因?yàn)樵谒嵝詶l件下,RNA被分配于水相,而DNA在有機(jī)相,從而達(dá)到分離獲得RNA的目的。水飽和酚同時(shí)能使蛋白質(zhì)變性、沉淀,從核酸提取液中將蛋白質(zhì)分離除去。
(2)用于DNA提取時(shí),酚是強(qiáng)的蛋白變性劑,可以使細(xì)胞或組織中的蛋白質(zhì)變性析出。 而Tris的主要作用是防治止酚類(lèi)氧化,若酚類(lèi)氧化,則會(huì)形成醌(兩個(gè)苯環(huán)),醌含有強(qiáng)自由基,會(huì)破壞核酸結(jié)構(gòu)。 同時(shí),由于PH值大于7,在堿性環(huán)境中DNA處于水相,RNA處于有機(jī)相。從而分離上清。
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